Síntese e Caracterização de Membranas/Compósito de Colágeno e Hidroxiapatita para Reconstituição Óssea guiada.

Abstract

Quando defeitos ósseos assumem grandes dimensões podendo não ser mais regenerados naturalmente, faz-se necessário o uso de técnicas para a correção desses defeitos, entre esta destaca-se a Regeneração Óssea Guiada (ROG). A ROG utiliza-se de uma membrana sintética ou de origem natural para excluir as células do tecido conjuntivo (altamente competitivas) do defeito ósseo. Desta forma, as células ósseas reabsorvem preferencialmente o coágulo formado na região, acelerando o processo de reparo ósseo. O presente estudo propõem a síntese de compósitos de colágeno tipo I/ Hidroxiapatita (HAp) conformados na forma de membrana. Foi empregado como fonte de colágeno dois tipos de tecidos de origem bovina, o Pericárdio Bovino (PB) e do Tendão de Aquiles Bovino (TB), ambos ricas em colágeno do tipo I. As amostras de HAp de natureza sintética foram submetidas a tratamento térmico, entre 900 e 1100°C, caracterizadas por difração de Raio-X. Picos referentes à HAp foi observada, assim como o aparecimento de uma fase cristalina de β-fosfato de cálcio, com o aumento da temperatura de tratamento. Para extração de colágeno tipo I, PB e TB foram coletados de animais abatidos em frigorífico registrados pelo SIF (Serviço Federal de Inspeção) e devidamente conservados em gelo logo após a remoção. Em períodos de no máximo 48 horas após abate, artérias, tecidos conjuntivo suprajacentes, bem como tecidos adiposos foram removidos utilizando pinças e bisturi, mantendo sempre a assepsia no ambiente de trabalho. Os tecidos foram lavados em solução de ringer lactato, e água destilada gelada. Foram confeccionados retalhos de 30x50 mm para PB e fragmentos de 30mm de comprimento para TB. Estes retalhos foram conservados em glicerina, por período não superior a 3 meses. Na extração do colágeno, os retalhos de PB e TB foram tratados com acetona e hidróxido de sódio para desidratação e retirada de tecido adiposo. A pepsina em meio ácido (ácido acético) foi empregada para o rompimento das interações entre as cadeias de colágeno, empregando agitador tipo mixer (velocidade de 5000rpm), expondo as fibras à digestão péptica. O sobrenadante mais gelatinoso obtido, rico em colágeno, foi separado e caracterizado por eletroforese em gel de poliacrilamida (PAGE-SDS) e FTIR (espectroscopia na região do infravermelho com transformada de Fourier). O peso molecular e as bandas de absorção na região do IR (infravermelho) foram coerentes com a molécula de colágeno do tipo I. O compósito foi obtido após a homogeneização do colágeno disperso em meio ácido, com a HAp utilizando-se agitador magnético durante 1 h. Após dispersão a mistura foi acondicionada em formas e liofilizada em temperatura criogênica durante 72 h. As membranas obtidas foram caracterizadas por Microscopia Eletrônica de Varredura (MEV) e devidamente esterilizadas para encaminhamento ao teste de citotoxicidade in vitro. Pôde-se notar a interação dos cristais de HAp à estrutura fibrilar (lamelar) do colágeno extraído, assim como a não citotoxicidade do material final obtido.